PCR & qPCR in der Lebensmittelanalytik
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PCR & qPCR in der Lebensmittelanalytik
Wann und Wo?
Datum: Di.: bis Do.: 14. bis 16. Mai 2024
Dauer: 3 Tage - Dienstag bis Donnerstag
Zeit: 9:00 Uhr bis 16:30 Uhr
Ort: Bremen
Einführung
Seit
einigen Jahren hat sich die real-time PCR (real-time PCR, qPCR) in der
Lebensmittelanalytik etabliert. Sei es auf dem Gebiet der Erkennung von
mikrobiologischen Kontaminationen, dem Nachweis und der Quantifizierung
von GVOs oder dem Tierartennachweis. Als geschlossenes System ist die
Methode in der Durchführung einfach, schnell, sicher und günstig. Bei
richtiger Durchführung zeigt sie eine hohe Sensitivität, geringe
Anfälligkeit für Kontaminationen (falsch positive Ergebnisse) und durch
die Möglichkeit der Multiplex-Technik einen hohen Durchsatz. Wir werden
uns mit drei Gebieten beschäftigen, dem Nachweis von mikrobiologischen
Keimen, Nachweis von GVO und der Tierartbestimmung.
Lernziele
Am Ende des Kurses werden Sie in der Lage sein Aufgaben aus
den drei Fachgebieten anhand von Kits experimentell abzuarbeiten, sie
können die Daten auswerten und interpretieren. Die real-time PCR
typischen Fachbegriffe sind ihnen geläufig und sie können mit Ct-Werten
arbeiten.
Zielgruppe
Technische oder wissenschaftliche MitarbeiterInnen. Sie haben
molekularbiologische Erfahrung und arbeiten mit real-time PCR bzw.
möchten demnächst mit real-time PCR arbeiten. Sie wollen mehr verstehen
von dem was Sie tun.
Gut zu wissen:
Sie arbeiten mit nicht-infektiösen, nicht-vermehrungsfähigen biologischen Material.
Sie benötigen keine Kenntnisse in real-time PCR,
Grundkenntnisse bzgl. DNA/RNA und klassischer PCR sind von Vorteil,
können aber auch auf unserer Lernplattform wiederholt werden. Die
Zugangsdaten für den Vorkurs erhalten Sie nach der Kurs-Anmeldung.
Wenn Sie unsicher sind, ob der Kurs das Richtige für Sie ist, fragen sie uns.
Wir arbeiten mit unserem eigenen real-time Cycler der neuesten Generation von BMS, baugleich mit dem RIDA(R)-Cycler und einem zweiten Leihgerät mit Unterstützung von Biozym.
Einzelne Begriffe hab ich Ihnen verlinkt auf unsere Wissensdatenbank.
"Nur der Dumme muß alle Erfahrungen selber machen." (Laotse).
Praxisteil I (qPCR, Nachweis)
- Präparation von DNA mittels Säulchen Methode und Schnell-Methoden
- Nachweis von z. B. Salmonella/Legionellen DNA: Arbeiten mit Sequenz-unspezifischer Detektion, Standard-Verdünnungskurve und Schmelzkurve
- Interpretation einer SYBR/Eva-Green Schmelzkurve, Unterscheidung von Dimeren und Hauptprodukt, Was tun bei Dimeren?
- PCR-Parameter: Bestimmung der Effizienz und des R2-Wertes aus der Standardkurve, Welche Grenzwerte muss mein qPCR einhalten? Bestimmung der Nachweisgrenze (LoD) und Quantifizierungsgrenze (LoQ).
- Nachweis von Salmonella/Legionella mittels Sequenz-spezifischer Detektion Sonden-Systeme
Praxisteil II (Tierartbestimmung)
- Präparation von DNA mittels Magnet-Bead Technologie
- 4Plex-PCR z. B. Nachweis von Schwein, Huhn und Truthahn
- Diskussion von Nachweisgrenze, Quantifizierungsgrenz, Matrix-Effekte Inhibition
Praxisteil III (GVO-Nachweis)
- Präparation von DNA mit schwieriger Matrix
- Nachweis von gentechnisch modifizierten Organismen (GVO) mittels Multiplex Real-Time PCR
- Screening für GVO: GMO SCREEN 4plex 35S/NOS/FMV+IAC
- Auswertung und Trouble Shooting
Themen des Theorie-Seminars
- Einführung in die real-time PCR (Wiederholung)
- Prinzip der Real Time PCR
- Grundlagen der Real Time PCR: Detektionsformate, Ct-Werte, Threshold, Baseline, Farbstoffe und Kanäle etc.
- Real Time PCR Zielsequenzen: Sequenzen, Primer und Sonden LFGB-Methoden zum Nachweis von Pathogenen, zur Identifizierung von Arten und zum Nachweis und GVO
- Lebend/tot-Nachweis über Real Time PCR
- Besprechung von Nachweis, Screening- und Quantifizierungs-Kits
- Diskussion an Beispielen von Nachweisgrenze und Quantifizierungsgrenze (LOD, LOQ)Nachbesprechung
Nachbesprechung
Zusätzlich
biete ich eine gemeinsame Online-Fragestunde für Trouble-Shooting oder
weitergehende Fragen an. Die Fragestunde wird mit GoTo-Meeting
durchgeführt.